用hp20大孔吸附树脂提取mevastatin的研究|上海摩速科学器材有限公司-凯发官方首页
周鹃 印培民
摘要:报道了用hp20大孔吸附树脂从发酵液中提取mevastatin的研究结果。hp20大孔吸附树脂每ml湿树脂对mevastatin的吸附能力为83.8 mg 。用本方法制取的mevastatin 纯度达95%(hplc),完全符合用于pravastatin的生产。 关键词:hp20大孔吸附树脂;mevastatin;吸附 中图分类号:tq460.6 4;r972 .6;tq424.3 文献标识码:a1 材料和方法
1.1 吸附树脂
studies on extraction of mevastatin by macroreticula adsorbent hp20
zhou juan1, yin pei-min2 (1.jiangxi institute for drug control, nanchang 330046, prc; 2.institute of microbiology,jiangxi academy of sciences, nanchang 330029,prc)
abstract:this paper described the method of recovery of mevastatin from fermentation liquid by macroreticula adsorbent hp20.the adsorption ability of hp20 is 83.8 mg mevastatin/ml resin.the purity of mevastatin produced by this method is detected as 95% with hplc.this technic is highly suitable for using as the raw material for pravastatin production. key words:macroreticula adsorbent hp20;mevastatin;adsorption
羟甲基戊二酰辅酶a还原酶(hmg-goa)抑制剂pravastatin na是**由高血脂引起的心血管**的*新一代**药。pravastatin na的生产方法为微生物二步发酵法。先由青霉(penicillium citrinum)从糖发酵生产mevastatin(又名compactin,ml-236b)。经提取精制得到的mevastatin在naoh作用下转化为mevastatin na,再由streptomyces carbophilus等具有羟基化酶活性的微生物发酵转化为pravastatin na[1,2]。 关于从发酵液中提取精制mevastatin的方法,有报道:有机溶媒萃取结合各种层析技术[3,4],但未见其它论文公开报道。我们通过实验选出了hp20大孔吸附树脂,它具有非常优良的对mevastatin的吸附性能,所构建的提取精制工艺简单、高效,**工业应用价值。
hp20(diaion),使用前按常规处理。 1.2 mevastatin发酵液 由penicillium citrinum thom 38065发酵而得,mevastatin的质量浓度在400 mg.l-1左右。 1.3 mevastatin标准品 由日本静冈大学生物工学研究室提供。纯度为99%(hplc)。 1.4 试剂 各种试剂均为化学纯或hplc级。 1.5 mevastatin的分析方法 mevastatin的浓度用高压液相色谱法测定(岛津lc-10ad型)。 流动相:甲醇77%、水22.8%、醋酸0.1%、三乙胺0.1%。 流 速:1.0 ml.min-1。 分析柱:str ods-ii,4.6 mm×150 mm(日本信和化工株式会社)。 测定波长(λ):237 nm。 测定温度:25 ℃。 测定时间:10 min (mevastatin的保留时间为(6.5±0.2) min)。 1.6 采用动态吸附法[5] 样品被吸附后,树脂用无盐水洗涤,φ=0%~100%丙酮梯度解吸。
mevastatin溶液在hp20树脂上的吸附曲线如图1 (fig.1)所示。v吸附(滤液量)∶v(hp20树脂)在150∶1以内时,吸附效果*好,无mevastatin泄漏。当该体积比大于150∶1时,mevastatin的泄漏急剧上升。至170∶1时,树脂吸附基本完成,此后吸附量缓慢上升,至220∶1时,达吸附平衡状态。该吸附曲线表明,hp20树脂对mevastatin有很强的吸附力,每1 ml湿树脂对mevastatin的吸附量为83.8 mg。mevastatin发酵液在hp20树脂上的吸附行为亦如图所示,但总吸附量由于发酵液中各种杂质的影响而有所下降。此后用无盐水洗涤吸附树脂,以除去各种无机离子、部分色素等杂质。2 结果和讨论
2.1 mevastatin在hp20脂树上的吸附和解吸
mevastatin在hp20树脂上的解吸曲线如图2(fig.2)所示。采用φ=0%~100%丙酮梯度洗脱。当丙酮在φ=0%~20%时,大量吸附在树脂上的色素被洗脱而无mevastatin被洗脱。进一步将丙酮从φ=20%升至φ=100%时,被吸附在树脂上的mevastatin在φ=(30%~60%)的丙酮中被集中洗脱下来。所收集的含mevastatin的洗脱液为淡黄色,浓缩比达15倍以上。充分体现了梯度洗脱液体积小,时间短的特点。之后树脂在高体积分数的丙酮下完成清洗,用水再生后即可重新使用。
2.2 实验室提取实验 用hp20树脂从发酵液中提取精制mevastatin的工艺如下:发酵液经过滤得滤液,滤液用2 mol.l-1 hcl调ph至7.0,进hp20树脂柱吸附。当进样量达到树脂的工作吸附容量,即检有mevastatin漏出时,停止进样。继而用无盐水洗涤hp20树脂后,用φ=(0%~100%)丙酮梯度洗脱,收集含mevastatin的解析液。用w=0.05%活性炭脱色后,蒸去丙酮,浓缩冻干得mevastatin粗品。粗品用少量φ=35%的丙酮复溶后,加入3~5倍ph 2.0的蒸镏水结晶得mevastatin。各步收率和纯度见表1(tablel)。
table 1 recovery and purification of mevastatin from fermentation liquid of penicillum citrinum
用hp20大孔吸附树脂提取mevastatin的研究 |
step |
volume/ml or weight/mg |
conc.of mevastatin /mg.ml-1 |
amount of mevastatin/mg |
yield /% |
fermentation liquid |
1 200 |
0.385 |
462.0 |
100.0 |
elution from hp20 |
150 |
2.775 |
416.2 |
90.0 |
decolorization |
200 |
1.646 |
329.3 |
79.0 |
crystallization |
284 |
95.1%(purity) |
270.0 |
82.0 |
total |
|
|
|
58.5 |
3 小结
(1)在本实验的条件下,hp20树脂吸附mevastatin,每ml湿树脂对mevastatin的工作吸附量为78.6 mg,每ml湿树脂对mevastatin的平衡吸附量为83.8 mg 。 (2)用本方法制得的 mevastatin纯度为95%(hplc),完全符合用于pravastatin的生产。 (3)本方法过程简单,易操作,总收率为58%,较已报道的方法更适于工业化生产。
[1] hossobuchi m,shioiri t,ohyama j, et al.production of ml-236b,an inhibitor of 3-hydroxy-3-methylglutaryl coa reductase by penicillium citrinum:improvement of strain and culture conditions [j].biosci biotech bioeng,1993,57:1414~1419. [2] 岸田有吉,内藤 敦,岩藤诚吾,等.プラバスタチンの开发研究[j].日本药学杂志,1991,111(9):469~487. [3] 日本公开特许49-64823(1975)[p]. [4] 日本公开特许56-51992(1981)[p]. [5] 印培民,沈 卫,周 鹃:h-103大孔网状吸附剂提取林可霉素的研究[j].中国***杂志,1993,18(4):310~311
作者简介:(1966-),女,江西南昌市人,硕士,1987年7月毕业于华东理工大学生化工程系,1999年3月于日本静冈大学研究生院获硕士学位. 作者单位:周鹃(江西省药品检验所,江西南昌 330046) 印培民(江西省科学院微生物研究所,江西南昌 330029)参考文献:周鹃
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