尹利端1，王桐1，宋文山2，刘楚怡2，3，*，仲米存1，杜芬2，李八方2，3
（1.烟台新时代健康产业有限公司，山东烟台264006；2.青岛海洋生物医药研究院，山东青岛266001；3.中国海洋大学，山东青岛266073）
摘 要：通过动物实验对不同分子量松花肽的增强**力活性进行研究。从松花粉粕中制备平均分子量在1 kda～3 kda和小于1 kda范围的两种松花肽，分析其氨基酸组成，进而研究两种分子量松花肽在增强细胞**、体液**和单核-巨噬细胞**功能上的活性。研究发现，两种分子量的松花肽，都具有显著增强细胞**功能、增强体液**功能和增强单核-巨噬细胞功能的作用。综上所述，小于1kda松花肽和1kda～3kda松花肽，都具有增强**力的功能。
关键词：松花粉；松花肽；分子量；增强**力；动物实验
doi：10.3969/j.issn.1005-6521.2019.03.011
作者简介：尹利端（1979—），男（汉），工程师，硕士，研究方向：功能食品的研究、开发与产业化。
*通信作者：刘楚怡（1986—），女（汉），博士，研究方向：新资源食品及其功能性研究与开发。
study on immune function enhancing of mouse with different molecular weights of peptides from pine pollen
yin li-duan1，wang tong1，song wen-shan2，liu chu-yi2，3，*，zhong mi-cun1，du fen2，li ba-fang2，3
（1.yantai new era health industry chemical co.，ltd.，yantai 264006，shandong，china；2.marine biomedical research institute of qingdao，qingdao 266001，shandong，china；3.ocean university of china，qingdao 266073，shandong，china）
abstract：animal experiments were conducted to study the enhanced immunity activities of different molecular weight peptides from pine pollen.two kinds of pine pollen peptides with an average molecular weight of 1 kda-3 kda and less than 1 kda were prepared from pine pollen residues.the amino acid composition was analyzed，and the cellular immunity，humoral immunity，and mononuclear-macrophage immune functional activity of pine pollen peptides were studied.the studies had found that two molecular weights of pine pollen peptides had a significant role in enhancing cellular immunity，enhancing humoral immunity，and enhancing mononuclear macrophage function.in summary，both of the peptides had the function of enhancing immunity.
key words：pine pollen；pine pollen peptide；molecular weight；enhancement of immune function；animal experimenty
引文格式：
尹利端，王桐，宋文山，等.不同分子量松花肽增强小鼠**力的功能研究[j].食品研究与开发，2019，40（3）：61-65
yin liduan，wang tong，song wenshan，et al.study on immune function enhancing of mouse with different molecular weights of peptides from pine pollen[j].food research and development，2019，40（3）：61-65
松花粉是指经人工采集得到的干燥松树花粉，作为生命的遗传物质，含有丰富的蛋白质、微量元素、黄酮及必需脂肪酸等营养成分[1]及生物活性物质[2]，具有抗衰老、抗氧化、抗疲劳、促进生长发育、调整机体代谢等多种功效[3]。目前松花粉水提物的制备技术已相对成熟，并形成了国珍松花粉等一系列在售产品。但在松花粉水提物的制备过程中，却产生了大量的松花粉粕残渣，这些残渣中还存在着大量上等的蛋白质资源尚未得到充分利用。一般认为松花粉中蛋白质胜于酪蛋白，且质量高于牛肉、鸡***白[4]。简单的丢弃松花粉粕不仅会带来环境的压力，也造成了大量营养物质的浪费。因此，安全高效的从松花粉粕中制备具有生物活性的松花肽，成了亟待解决的问题。目前国内关于从松花粉粕中制备活性松花肽的研究未见报道，利用松花粉粕开发具有生物活性的松花肽，具有重要的理论意义和应用价值。
生物活性肽就是指一类相对分子质量小于6 kda，介于氨基酸与蛋白质之间的分子聚合物[5]，具有增强机体防御功能、调节生命节律、预防**和促进康复等多种生物学功能的多肽[6]。具有增强**功能的活性肽称作**活性肽[7]。近年来，已经发现了一些天然**活性肤如胸腺肤等，可诱导**细胞分化、增殖与成熟，增强巨噬细胞的吞噬能力[8]，提高机体对外界病原物质的抵抗能力，提高**低下小鼠的**活性[9]。部分**活性肽已经作为一种**因子应用于医学临床抗感染、**缺乏症的**上，并且起到了良好的**效果[10]。
本研究从松花粉粕中制备1 kda～3 kda和小于1 kda两种分子量的松花肽，并按照《保健食品检验与评价技术规范》（2003版）[11]要求，对两种平均分子量松花肽的增强**力功能进行了研究。
1 材料和方法
1.1 材料与仪器
松花粉粕：山东烟台新时代健康产业有限公司；胰蛋白酶（10 000 u/g）：南宁庞博生物工程有限公司；无水乙醇（分析纯）、氢氧化钠（分析纯）、三***（分析纯）、三氟乙酸（分析纯）、硫化钠（分析纯）、乙腈（色谱纯）：北京化学试剂公司；3-（4，5-二甲基噻唑-2）-2，5-二苯基四氮唑溴盐 [3-（4，5-dimethyl-2-thiazolyl）-2，5-diphenyl-2-h-tetrazolium bromide，mtt]、牛血清蛋白、维生素b12、谷胱甘肽及胶原蛋白：sigma公司；giemsa液：索莱宝公司。
agilent 1260高效液相色谱仪、agilent 1100型氨基酸自动分析仪：美国安捷伦公司；msm2013实验室用膜分离设备：上海摩速科学器材有限公司；uv-2010pc紫外可见分光光度计：尤尼克（上海）仪器有限公司；versamax tunable microplate reade光栅式恒温酶标仪：versamax tunable公司；bx43荧光显微镜：olympus公司。
spf级昆明小鼠：山东朋悦实验动物繁育有限公司。