黄曲霉**b1**亲和柱 说明书 whatman 934-ah 上海摩速代理
黄曲霉**b1**亲和柱
使用说明书
【产品用途】
黄曲霉**b1（afb1）**亲和柱适合于和afb1酶免分析试剂盒、hplc或液质结合使用，定量检测afb1。用该**亲和柱净化样品，提高了样品的纯度。纯化后的样品可用不同的分析方法测定。
【适应范围及产品性能】
用于定性、定量检测谷物、粮油、饲料等样本中afb1时的样本前处理。
柱吸附能力： ≥50ng/支，≥100ng/支 （可根据要求选择相应柱容量）；
回收率：75%~90%。
柱内凝胶：protein a琼脂糖凝胶
特点：载量大，单抗定向偶联，易洗脱，回收率高。
【测定原理】
本产品测定的基础是抗原抗体反应，黄曲霉**b1（afb1）单克隆抗体连接在柱内凝胶介质上，样品中的afb1经过提取、过滤、稀释，然后将样品提取液缓慢通过afb1**亲和柱，在**亲和柱内，afb1与抗体结合，洗涤液通过**亲和柱除去未被结合的杂质。*后采用甲醇洗脱afb1，然后进行相关分析。
【产品组成】
标准品（选配）；
25支/盒；1ml柱管/支；
说明书1份；
【所需材料】
（1）设备及器皿耗材：天平、粉碎机、离心机、高速均质器（18000r/min~22000
r/min）；量筒、50ml玻璃漏斗、微量移液器（100μl~1000μl）、定量滤纸、玻璃微纤维滤纸（直径11cm，孔径1.5μm whatman 934-ah 1827-110）、20ml玻璃注射器等。
（2）试剂：甲醇（色谱级）、ph7.4磷酸盐缓冲液（pbs）、ph7.0磷酸盐缓冲液（pbs）、吐温-20、蒸馏水或去离子水。
【样品制备及净化】
（1）谷物、花生及其制品
----准确称取25.0g粉碎的样品，加入5.0g氯化钠，
----与125.0ml甲醇-水溶液（7 3）混合，以均质器高速搅拌提取2min或振荡提取30min，
----用定量滤纸过滤，
----准确移取15ml滤液并加入30ml水稀释，用玻璃微纤维滤纸过滤，至滤液澄清，备用。
----准确移取15.0ml混合液进行过亲和柱。
（2）酱油
----准确称取50.0g样品， 加入2.5g氯化钠，
----加入甲醇-水溶液（8 2）至100ml，以均质器高速搅拌提取2min或振荡提取30min，
----用定量滤纸过滤，
----准确移取10.0ml滤液并加入40.0ml水稀释，用玻璃微纤维滤纸过滤，至滤液澄清，备用。
----将滤液调至ph为中性。
----准确移取10.0ml混合液进行过亲和柱。
（3）醋
----准确称取5.0g样品，加入1.0g氯化钠，
----用ph7.0的磷酸盐缓冲液稀释至25.0ml，混匀，
----用定量滤纸过滤，
----加10.0ml滤液加入10.0ml ph7.0的磷酸盐缓冲液，混匀，用玻璃微纤维滤纸过滤至滤液澄清，备用。
----将滤液调至ph为中性。
----准确移取10.0ml混合液进行过亲和柱。
（4）植物油脂
----准确称取25.0g样品，加入5.0g氯化钠，
----加入甲醇-水（7 3）至125.0ml，以均质器高速搅拌提取2min或振荡提取30min，
----用定量滤纸过滤，
----准确移取15.0ml滤液加入30.0ml水稀释，用玻璃微纤维滤纸过滤，至滤液澄清，备用。
----准确移取15.0ml混合液进行过亲和柱。
（5）草药、香料及茶叶
----准确称取25.0g粉碎的样品，加入5.0g氯化钠，
----与125.0ml甲醇-水溶液（7 3）混合，以均质器高速搅拌提取2min或振荡提取30min，
----用定量滤纸过滤，
----准确移取10.0ml滤液并加入30.0ml水稀释，用玻璃微纤维滤纸过滤，至滤液澄清，备用。
----准确移取20.0ml混合液进行过亲和柱。
【亲和柱净化】
注意：整个纯化过程尽量不要让柱子干燥！
----将柱子上方堵头取出后斜剪断，然后再插回柱子上；
----将20ml注射器连接于**亲和柱上部，用5~10ml
ph7.4磷酸盐缓冲液（pbs）或者去离子水平衡柱子，以1滴/秒的速度通过**亲和柱，样品提取液必须缓慢地连续地通过柱子（用注射器加以正压或用真空泵施加负压，也可以使用泵流操作架配合**亲和柱）；
----准确移取混匀提取液注入注射器中，调节针筒压力使其以1滴/2秒的速度缓慢通过**亲和柱；
----先用10ml 0.1%的吐温20-pbs溶液清洗，再用10ml 10%甲醇-水清洗，（主要针对酱油、醋、饲料等颜色较深的样品，其他可略去）；
----用20ml 水冲洗柱子，弃去流出液，流速2滴/秒，直至2~3ml空气通过柱体，保证柱子内没有残余液体；
----准确加入1.0ml色谱级甲醇洗脱，流速1滴/2~3秒，直至2~3ml空气通过柱体，保证柱子内没有残余液体。收集全部洗脱液待测。
【检测方法】
（1）afb1酶免试剂盒（苏微）检测
----用试剂盒中的样品稀释液以1:10稀释洗脱液（1份洗脱液 9份样品稀释液），取50μl进行测定。
注意：如果afb1污染较严重，需要进一步稀释样品，洗脱液*终必须稀释到10%甲醇，详见试剂盒说明书。
（2）hplc法检测
----可参考gb/t 18979-2003。
【注意事项】
（1）黄曲霉**对人体有害，应戴手套操作。凡接触到标样的玻璃器皿都要用5%次氯酸钠浸泡过夜。
（2）不要使用过有效期的**亲和柱。
（3）**亲和柱应在2~8℃保存。不要冷冻。
（4）使用前，**亲和柱需至少提前半小时回温至室温（25℃左右）。
（5）按以上的提取过程，样品通过柱子的实际体积等于1g 原物质，分析方法的检测限可以通过改变进柱的样品体积而改变。
（6）称取的样品量以及提取液的体积可根据实际情况按比例调整，建议*低不少于5g样。
（7）黄曲霉**对光线敏感，因此样品及其提取液应当低温（2~8℃）、避光保存。
【保存期】
有效期为12个月。
生产日期见包装盒。
【缓冲溶液配制】
ph7.4磷酸盐缓冲液（pbs）：
3gna2hpo4.12h2o，0.25gnah2po4.2h2o，8.7gnacl，用水定容至1l。
ph7.0磷酸盐缓冲液（pbs）：
25ml 0.2mol/l磷酸二氢钾溶液与29.1ml 0.1 0.2mol/l的氢氧化钠溶液混匀后，用水定容至100ml。
0.1%的吐温20-pbs溶液：
取ph7.4的pbs溶液1l，加入100ul吐温。